ELISA - Saggio Immunoassorbente Legato All'enzima: Trascrizione

Il metodo diagnostico (ELISA) è informativo e non troppo costoso, quindi molti laboratori offrono ai propri clienti questo metodo (saggio immunoassorbente legato all'enzima). Lo studio viene eseguito a stomaco vuoto, il sangue per l'analisi viene prelevato dalla vena cubitale del paziente. Si consiglia di non fumare o bere alcolici prima dell'ELISA.

Il contenuto dell'articolo:

• 1 Che cos'è un esame del sangue ELISA
• 2 Cosa sono le immunoglobuline
• 3 Come viene eseguito l'ELISA sul sangue
• 4 Test immunologico contro i parassiti con ELISA
• 5 Come viene utilizzato l'ELISA
• 6 Test per analisi immunologiche del sangue con ELISA
• 7 Scopo dell'analisi immunologica del sangue mediante ELISA
• 8 Indicazioni per l'uso e malattie rilevate da ELISA
• 9 Vantaggi del metodo ELISA
• 10 Svantaggi del metodo ELISA
• 11 Possibili risultati ELISA

Cos'è un esame del sangue ELISA

Tra i metodi di analisi del sangue, che consentono di valutare la capacità del corpo di resistere alle malattie infettive e di mostrare la fase della malattia, il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) occupa un posto importante. La realizzazione di questo studio consente di valutare in modo completo l'attività della funzione protettiva del sangue e identificare lo stato di immunodeficienza nelle patologie infettive, nonché malattie del sangue, processi autoimmuni e problemi ormonali.

Si tratta di uno studio di laboratorio che consente di determinare la presenza di specifici anticorpi (fattori protettivi del sangue di natura proteica) verso determinati antigeni (agenti patogeni). Tra gli anticorpi, le immunoglobuline, che possono esistere sotto forma di immunocomplessi, sono di fondamentale importanza.

Le immunoglobuline sono prodotte a seguito di complesse reazioni neuroumorali dell'immunità umana, derivanti come risposta all'introduzione di antigeni estranei. Per ogni tipo di agente patogeno vengono prodotti i propri anticorpi specifici. Agiscono "legando" un antigene o un microrganismo patologico, formando un composto complesso "antigene-anticorpo" con successiva neutralizzazione, lisi enzimatica, reazioni di fagocitosi e ritiro dall'organismo. È dalla presenza di alcuni complessi che il metodo ELISA determina il tipo di patogeno o sostanza nociva presente nel paziente.

A causa del prezzo basso e dell'uso del sangue come biomateriale, il metodo viene utilizzato come metodo di screening. Ad esempio, se si sospetta una parassitosi, i pazienti donano il sangue per determinare gli anticorpi contro nematodi, lamblia, ecc. Se il risultato è positivo, non dovresti iniziare immediatamente a trattare i parassiti: devi confrontare il quadro clinico, i risultati dell'ELISA e, possibilmente, i risultati di altri metodi di esame.

Vale la pena ricordare che dopo il corso completo del trattamento, gli anticorpi possono rimanere nel nostro corpo per un tempo molto lungo, anche dopo che l'infezione ha lasciato il nostro corpo, ad es. la cosiddetta "cicatrice sierologica" rimane. Ad esempio, ci sono migliaia di stelle nel cielo notturno. Molte di queste stelle sono morte da tempo, ma la loro luce è rimasta splendente fino ad ora, da secoli. In effetti, vediamo solo una traccia di stelle. C'è luce, ma la stella è scomparsa da tempo.

Ma se non c'è luce, ciò non significa che la stella non fosse lì. È lo stesso con gli anticorpi. La loro presenza non garantisce la presenza dell'agente infettivo desiderato nel corpo. L'assenza di anticorpi non significa che non vi sia infezione. Se il risultato dell'analisi di ELISA è positivo, significa che è necessario cercare un'infezione con metodi più specifici e costosi: PCR, colture batteriologiche. Un risultato falso positivo è possibile se diversi microbi hanno una struttura antigenica simile, quindi verranno prodotti anticorpi "simili" per microbi diversi.

Cosa sono le immunoglobuline

Sono state scoperte e studiate 5 classi principali di immunoglobuline: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. il ruolo del resto non è stato ancora completamente chiarito ed è allo stadio della ricerca scientifica.

Il compito principale dell'immunoglobulina A (IgA) sono le funzioni protettive delle mucose delle vie respiratorie, del tratto gastrointestinale e del sistema urinario. Con un inizio acuto della malattia, è impossibile identificarli. Questi complessi protettivi compaiono solo a partire da 2 settimane dall'inizio della malattia, a volte più tardi. La maggior parte dell'immunoglobulina A è concentrata nei tessuti mucosi. Circa l'80%. Il resto degli anticorpi circola nel sangue.

La funzione principale è neutralizzare e distruggere i microrganismi. Dopo che le manifestazioni acute della malattia si sono attenuate, la quantità di queste immunoglobuline inizia a diminuire e scompare completamente fino a 8 settimane dopo l'inizio della malattia. Se l'IgA viene rilevato in un secondo momento, ciò indica la cronologia del processo.

I principali e primi marcatori della fase acuta della patologia in via di sviluppo sono le immunoglobuline di classe M (IgM). Si riscontrano entro il 5 ° giorno dall'inizio del malessere. La loro presenza nel sangue può essere determinata per circa 6 settimane. Quindi iniziano a scomparire rapidamente.

La risposta immunitaria residua è caratterizzata dalla presenza di immunoglobuline di classe G (IgG) nel sangue. La comparsa di questi fattori nel sangue viene rilevata circa un mese dopo l'inizio della malattia. In futuro, possono essere determinati per molti mesi, anni e persino per tutta la vita, svolgendo una funzione protettiva contro il ritorno (ricaduta) della malattia e in alcuni casi rendendo impossibile lo sviluppo secondario della patologia.

Se la quantità di immunoglobulina G ricomincia a salire, si può sospettare una nuova infezione. Una conclusione simile può essere ottenuta effettuando due o tre test effettuati con un intervallo di 2 settimane.

Nella pratica della parassitologia viene utilizzata l'immunoglobulina E (IgE) L'immunoglobulina D (IgD) si trova sui linfociti B e si trova a basse concentrazioni nelle persone sane. Dopo 10 anni di vita raggiunge i suoi valori massimi. La quantità di immunoglobulina D aumenta durante la gravidanza, in pazienti con malattie sistemiche del tessuto connettivo, asma bronchiale e malattie causate da uno stato di immunodeficienza.

Come viene eseguita l'ELISA sul sangue?

Per il dosaggio immunoenzimatico, nella maggior parte dei casi, viene utilizzato il sangue dei pazienti, a volte vengono prelevati il tessuto vitreo, il fluido del canale spinale e il liquido amniotico.

Il sangue viene aspirato attraverso un ago per iniezione in una siringa dalla vena cubitale. Lo studio viene effettuato a stomaco vuoto. Va ricordato che l'assunzione di determinati farmaci può influire sul risultato del test. Prima di donare il sangue, è necessario astenersi dal fumare e dal bere alcolici. L'assunzione di sostanze stupefacenti può distorcere i risultati.

In caso di valori negativi di immunoglobuline IgM, IgG, IgA, possiamo parlare dell'assenza della malattia o della sua fase iniziale, e il risultato con svantaggi è possibile con un recupero completo dopo un considerevole lasso di tempo.

Se IgA e IgM non vengono rilevate e IgG si manifesta positivamente, allora con ogni probabilità stiamo parlando dell'immunità formata dopo una malattia infettiva o dopo la vaccinazione.

Se IgA e IgM non vengono rilevate e IgG si manifesta positivamente, allora con ogni probabilità stiamo parlando dell'immunità formata dopo una malattia infettiva o dopo la vaccinazione

Nel caso di un titolo elevato di IgM con valori negativi di IgG, IgA, si può concludere che esiste una malattia infettiva acuta.

Valori positivi simultanei dei risultati delle immunoglobuline - IgA, IgM, IgG sono caratteristici della fase acuta di recidiva della malattia cronica esistente.

Per un'infezione cronica nella fase di ritenzione del processo (remissione), ELISA mostra valori negativi di immunoglobulina M (IgM), mentre il risultato delle immunoglobuline G (IgG) e A (IgA) sarà positivo.

Test immunologico per parassiti con ELISA

ELISA è l'abbreviazione di saggio immunosorbente legato all'enzima per i parassiti. Implica test medici del sistema immunitario di una persona. Il test si basa sulla capacità degli anticorpi di cambiare colore. Questo metodo diagnostico ha molte caratteristiche positive. Ad esempio, è in grado di rilevare un'enorme varietà di malattie causate dall'infezione. È più efficace nei casi di malattie causate da organismi parassitari.

Cosa offre la tecnologia presentata: determinazione della presenza di elminti nel sangue; alla ricerca di altri agenti patogeni nel corpo; puoi scoprire le ragioni del deterioramento della tua salute; il trattamento si basa anche su analisi ottenute in questo modo; puoi monitorare la salute del tuo sistema immunitario.

Un'altra buona caratteristica è la capacità di tracciare i marcatori del cancro, indipendentemente dalla loro origine, ma ovviamente soggetta alla loro presenza nel corpo. Questo test è adatto anche per descrivere lo stato del sistema riproduttivo umano. La presenza di determinate proteine, ormoni e peptidi consente di giudicare il potenziale del partner in termini di concepire un bambino, nonché la presunta qualità del futuro feto.

Un esame del sangue per Giardia è una pratica abbastanza popolare tra i medici moderni. Inoltre, questo metodo di ricerca è un ottimo strumento per l'analisi biomedica e la statistica quantitativa in termini di antigeni specifici.

Come viene utilizzato il metodo ELISA?

Sarebbe un grosso errore confondere il metodo ELISA con il metodo di sondaggio e successivo studio delle feci. Questi ultimi vengono eseguiti con metodi a livello microscopico, quando viene prelevato un campione di feci fornito da un paziente, oppure viene prelevato da un potenziale paziente direttamente in un istituto medico. Nel campione, cercano di rilevare invasioni elmintiche e altri componenti, in un modo o nell'altro associati all'attività vitale dei parassiti. Non vengono studiati solo organismi parassiti microscopici, ma anche i loro resti, le loro uova e larve.

Interpretare l'ELISA potrebbe non darti una comprensione completa del problema, quindi è meglio consultare un medico o un assistente di laboratorio. È anche un errore credere che questo metodo sia rilevante solo se gli elminti parassitano nell'intestino. Vengono diagnosticati anche molti altri organi: i parassiti possono vivere nel duodeno, nelle vie biliari, nel fegato e persino nel pancreas.

È vero, questi sono casi più complessi, quindi la qualità di tale analisi dipenderà in gran parte dai lavoratori del laboratorio che eseguono i test. Caratteristiche della tecnologia e sua differenza rispetto alle vecchie ricerche di laboratorio:

• ora, invece di un campione di feci, viene utilizzato il sangue per determinare la presenza di elminti;
• lo studio del campione viene effettuato in laboratorio molto rapidamente, il giorno successivo è possibile ottenere informazioni complete;
• il costo della ricerca di laboratorio è poco costoso, poiché la teologia è molto semplice;
• un esame del sangue per gli elminti fornisce alti tassi di precisione.

La rilevanza e la plausibilità dei risultati dei test sono direttamente proporzionali alle qualifiche del personale medico, alle attrezzature tecniche del laboratorio, nonché all'assenza di qualsiasi negligenza o disattenzione da parte dei medici. Tuttavia, anche l'assistente di laboratorio più attento e responsabile incontrerà enormi difficoltà se il parassita è presente nel corpo nella sua popolazione minima, o se la frizione è stata eseguita immediatamente al momento del test.

Analisi immunologica del sangue mediante ELISA

Poche persone sanno cosa sono gli esami del sangue dal punto di vista del sistema immunitario umano, poiché questi test non sono così comuni. Di norma, un tale esame del sangue fornisce informazioni sul virus dell'immunodeficienza nel corpo umano ed è anonimo, poiché viene eseguito su richiesta del paziente.

Fondamentalmente, per l'analisi ELISA, il materiale biologico in esame è il sangue, tuttavia si possono esaminare il liquido cerebrospinale, il contenuto del corpo vitreo, il liquido amniotico, ecc.

Per il prelievo viene utilizzato il sangue prelevato da una vena a stomaco vuoto, da cui si ottiene il siero per la ricerca per centrifugazione. Inoltre, lo studio del siero sanguigno può rivelare una serie di malattie a trasmissione sessuale (sifilide, herpes, clamidia), nonché tutti i tipi di epatite, morbillo, rosolia, parotite e toxoplasmosi.

Fondamentalmente, per l'analisi ELISA, il materiale biologico in esame è il sangue, tuttavia si possono esaminare il liquido cerebrospinale, il contenuto del corpo vitreo, il liquido amniotico, ecc.

Le immunoglobuline sono molecole immunitarie che possono legarsi e neutralizzare la maggior parte degli agenti patogeni infettivi e delle tossine nel corpo. In questo caso, la caratteristica più importante delle immunoglobuline è la loro specificità, cioè la capacità di legarsi a uno specifico antigene. È questa proprietà che viene utilizzata per eseguire un esame del sangue per l'immunoglobulina.

Esistono cinque tipi di immunoglobuline, ma le più studiate sono le immunoglobuline A, M e G. Le immunoglobuline M e G sono attive nel sangue. Le immunoglobuline A sono una sorta di barriera sulla superficie delle mucose, poiché sono presenti in grandi quantità.

Un esame del sangue immunologico consente di determinare il tipo di immunoglobuline, grazie a ciò, ELISA consente non solo di diagnosticare la malattia, ma anche di determinarne lo stadio e di tracciare le dinamiche della malattia:

• nelle prime 2 settimane di malattia si trovano solo immunoglobuline A;
• dalla 2a alla 3a settimana di malattia, le immunoglobuline A e M si trovano nel sangue;
• CC3 per 4 settimane, un esame del sangue per l'immunoglobulina è determinato da tutti e tre i tipi;
• durante il recupero, le immunoglobuline M scompaiono nel sangue e la quantità di A e G diminuisce da 2 a 4 volte;
• in presenza di un processo cronico le immunoglobuline G sono necessariamente presenti nel sangue, le immunoglobuline M sono assenti, le immunoglobuline A possono essere presenti o assenti.

Scopo dell'analisi immunologica del sangue di ELISA

• Diagnostica delle malattie virali: epatite, herpes, virus Epstein-Barr, citomegalovirus, ecc.
• infezioni a trasmissione sessuale: clamidia, gonorrea, Trichomonas, micoplasma, ureaplasma;
• sifilide; endocrinologia (determinazione dei livelli ormonali);
• marker tumorali (diagnostica di malattie oncologiche); immunologia (diagnostica dell'immunodeficienza);
• allergologia (diagnosi e trattamento delle allergie).

L'analisi sierologica del sangue è un metodo di analisi del sangue di laboratorio utilizzato per diagnosticare malattie infettive e determinare lo stadio del processo infettivo. La risposta sierologica si basa sull'interazione di anticorpi e antigeni.

La determinazione degli antigeni viene utilizzata per determinare il genere e le specie di microrganismi. Questo metodo di ricerca è utilizzato in urologia e venereologia. Il sangue per un esame del sangue sierologico viene prelevato al mattino a stomaco vuoto da una vena.

Indicazioni per appuntamento e malattie rilevate con il metodo ELISA

Il principale biomateriale per ELISA è il siero di sangue: in laboratorio, dal paziente viene prelevato un campione di sangue da una vena, da cui vengono ulteriormente rimossi gli elementi sagomati che complicano l'analisi. In alcuni altri casi, per l'analisi vengono utilizzati liquido cerebrospinale, liquido amniotico, macchie di mucose, ecc.

Per evitare distorsioni nei risultati, si consiglia di donare il sangue a stomaco vuoto e due settimane prima dello studio (se l'obiettivo è diagnosticare malattie infettive croniche e latenti), è necessario interrompere l'assunzione di antibiotici e farmaci antivirali. È impossibile coprire l'elenco completo delle indicazioni per ELISA.

Gli obiettivi di analisi più comuni sono:

• diagnostica di malattie infettive acute e croniche: IgM e IgG per l'epatite virale A, B, C, E, nonché antigeni dell'epatite B e C; IgG all'HIV; Ig M e IgG contro l'infezione da citomegalovirus; Ig M e IgG al virus di Epstein-Barr; Ig M e IgG alle infezioni da herpes; Ig M e IgG alla toxoplasmosi;
• Ig M e IgG contro morbillo, rosolia, salmonellosi, dissenteria, encefalite trasmessa da zecche e altre malattie; IgG a malattie parassitarie; Ig M e IgG alle infezioni a trasmissione sessuale; Infezione da IgG a Helicobacter pylori. Valutazione generale degli indicatori dell'immunità umana e dei marker di alcune malattie autoimmuni. Identificazione di marker oncologici (fattore di necrosi tumorale, antigene prostatico specifico, antigene embrionale tumorale e altri). Determinazione del contenuto di ormoni nel siero del sangue (progesterone, prolattina, testosterone, ormone stimolante la tiroide e altri).

Vantaggi del metodo ELISA

I vantaggi indiscutibili dell'ELISA sono l'elevata sensibilità e specificità del metodo. La sensibilità è la capacità di riconoscere la sostanza bersaglio, anche se la sua concentrazione nel campione è bassa. La specificità, invece, implica l'accuratezza della diagnosi: se il risultato è positivo, significa che è stato trovato esattamente l'anticorpo o l'antigene che si presumeva, e non qualche altro.

ELISA ha ampiamente sostituito il "gold standard" della microbiologia - un metodo diagnostico batteriologico, durante il quale, per identificare il patogeno, era necessario isolarlo dal corpo e quindi far crescere la coltura in un terreno di coltura in una provetta per diversi giorni.

Per tutto il tempo, durante le analisi, i medici sono stati costretti a trattare il paziente "alla cieca", indovinando l'origine del microrganismo dai sintomi della malattia. La determinazione dell'IgM mediante ELISA consente di effettuare una diagnosi accurata già nei primi giorni di malattia.

L'alto grado di producibilità del dosaggio immunoenzimatico riduce al minimo l'influenza del fattore umano, riducendo la probabilità di errore. La maggior parte dei kit di test ELISA e dei reagenti utilizzati nei laboratori moderni sono prodotti in un ambiente industriale, il che garantisce un risultato accurato.

Svantaggi del metodo ELISA

Sfortunatamente, per eseguire l'ELISA, è necessario sapere cosa cercare esattamente: la tecnica di analisi implica che il medico abbia un'ipotesi in anticipo sulla natura della malattia. Pertanto, non ha senso prescrivere un tale test nella speranza di "indovinare" accidentalmente la diagnosi.

Nel caso della diagnosi di malattie infettive, il dosaggio immunoenzimatico non riesce a trovare il patogeno e a determinarne le proprietà specifiche: indica solo la presenza di anticorpi nel sangue del paziente, indicando indirettamente la presenza di un microrganismo estraneo nel corpo umano. L'ELISA è un metodo estremamente preciso, ma non economico, quindi è necessario utilizzarlo con saggezza e un medico qualificato dovrebbe interpretare i risultati.

Possibili risultati ELISA

A seconda del contenuto dell'analisi, il modulo può presentare dati sotto forma di una tabella che elenca tutti gli anticorpi o antigeni con note su una reazione negativa o positiva, oppure verrà indicato il valore quantitativo del risultato (negativo, debolmente positivo, positivo o nettamente positivo).

Quest'ultima opzione determina quanti anticorpi sono contenuti nel campione analizzato. Un altro indicatore quantitativo è l'indice di avidità degli anticorpi, espresso in percentuale. Indica quanto tempo è trascorso dall'inizio del processo infettivo (maggiore è l'indice, maggiore è).

Oggi vengono prodotti migliaia di tipi di sistemi di test ELISA, che consentono la rilevazione di anticorpi e antigeni specifici in un'ampia varietà di patologie. Pertanto, questa analisi viene utilizzata in quasi tutte le industrie mediche. La diagnosi fatta con l'ausilio di ELISA è garanzia della nomina di una terapia adeguata e di un trattamento efficace della malattia.

Se si dispone dei reagenti necessari e di una buona organizzazione del laboratorio, si riceverà il risultato del test entro 1-2 giorni dalla raccolta del sangue. In alcuni casi, se è necessaria una risposta di emergenza, questo periodo può essere ridotto a 2-3 ore.

Il risultato di un ELISA di alta qualità sarà un verdetto inequivocabile: la sostanza desiderata è stata trovata o non è stata trovata nel campione. Se parliamo di analisi quantitativa, la concentrazione può essere espressa come un valore numerico o un certo numero di segni "+" (da uno a più).

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