Analisi Del Sangue Immunodosaggio In Parassitologia

Quando sorgono difficoltà con la diagnosi, se il paziente ha una predisposizione ereditaria a determinate malattie, viene eseguito un test immunoassorbente legato all'enzima, al fine di valutare l'efficacia del trattamento. ELISA è un moderno test di laboratorio che aiuta a identificare gli anticorpi specifici nel sangue per determinate malattie. Il metodo è altamente specifico e sensibile.

Il contenuto dell'articolo:

• 1 immunodosaggio
• 2 Concetti di base e principio del metodo del dosaggio immunoenzimatico

• 3 Diverse classi di anticorpi IgG, IgM, IgA

  • 3.1 Anticorpi IgM
  • 3.2 Anticorpi IgG
  • 3.3 Anticorpi IgA
• 4 Vantaggi del metodo
• 5 Svantaggi del metodo
• 6 Indicazioni per appuntamento e malattie rilevabili
• 7 Il biomateriale analizzato e le caratteristiche della sua collezione
• 8 Tempistica di preparazione dei risultati ELISA
• 9 Interpretazione del dosaggio immunoenzimatico
• 10 Possibili risultati ELISA
• 11 In conclusione

Test immunosorbente collegato

L'analisi rivela antigeni caratteristici di alcuni agenti patogeni e anticorpi contro di loro. Il test immunoassorbente legato all'enzima si basa sulla reazione di interazione di un antigene con un anticorpo specifico, a seguito del quale si forma un complesso, che ha un'etichetta speciale nella sua composizione, che cambia il colore del campione sotto l'azione del reagente.

L'intensità della colorazione consente di giudicare la presenza di anticorpi o antigeni caratteristici di una particolare infezione e già con l'aiuto dell'attrezzatura viene determinata la loro quantità. Gli antigeni sono sostanze estranee che provocano una reazione di difesa immunitaria nel corpo - vengono prodotte proteine specifiche (immunoglobuline).

Ogni agente patogeno ha il proprio set di antigeni e anche la risposta immunitaria ad essi è specifica. Il materiale principale per l'analisi è il sangue da una vena.

Un test immunoassorbente legato all'enzima consente di identificare con elevata accuratezza malattie latenti in una fase precoce, informare il medico sulle condizioni generali del paziente e sui rischi di sviluppare patologie, sullo stato di salute riproduttiva.

Viene eseguita un'analisi per diagnosticare malattie virali: herpes, epatite, citomegalovirus, virus di Epstein-Barr, ecc., Infezioni a trasmissione sessuale: gonorrea, ureaplasma, clamidosi, micoplasma, Trichomonas, sifilide, per determinare i livelli ormonali, diagnosticare il cancro e immunodeficienza, rilevamento e trattamento delle allergie. Per l'analisi, oltre al sangue, puoi prendere anche liquido cerebrospinale, liquido amniotico e il contenuto del corpo vitreo.

L'analisi presuppone l'utilizzo di un gruppo di test ELI:

• Test ELI-B, che consente di trarre conclusioni sullo stato del sistema immunitario;
• ELI-Dia-test, che determina lo stato del sistema endocrino. Con il suo aiuto, viene diagnosticato il diabete del primo e del secondo tipo;
• ELI-N-Complex-12, che informa sullo stato dei sistemi nervoso periferico e centrale;
• ELI-Ankor-test-12, un'analisi che valuta lo stato del cuore e dei vasi sanguigni, valuta il rischio di sviluppare un ictus, infarto;
• ELI-Viscero-16 viene eseguito per valutare le condizioni generali del paziente. Questo test fornisce la diagnostica per 16 indicatori: intestino, sistema nervoso, miocardio, reni, sistema immunitario, fegato, stomaco, ecc.;
• ELI-P-complex-12 serve per valutare la capacità riproduttiva del corpo;
• ELI-GIT-12 - un'analisi che valuta lo stato del tratto gastrointestinale e consente di prevedere il rischio di sviluppare patologie;
• Il test ELI-HCG-APS, rivela disturbi della salute riproduttiva.

Concetti di base e principio del metodo del dosaggio immunoenzimatico

Il test immunoassorbente legato all'enzima (ELISA) è un metodo diagnostico di laboratorio basato sulla reazione "antigene-anticorpo", che consente il rilevamento di sostanze proteiche (inclusi enzimi, virus, frammenti batterici e altri componenti di fluidi biologici). Per capire come funziona il dosaggio immunoenzimatico, proviamo a capire l'essenza della reazione "antigene-anticorpo". Un antigene è una molecola estranea al corpo, solitamente di origine proteica, che può entrare nel corpo umano insieme a un agente infettivo.

Anche le particelle del sangue di qualcun altro (se non corrisponde al nostro gruppo) sono antigeni. Nel corpo gli antigeni sono in grado di provocare una risposta immunitaria volta a proteggere l'integrità dell'ambiente interno da sostanze estranee. Pertanto, il nostro corpo sintetizza sostanze speciali - anticorpi (immunoglobuline), in grado di connettersi con gli antigeni secondo il principio della "chiave per bloccare", legandoli in un complesso immunitario (questo processo è chiamato reazione "antigene-anticorpo").

Test immunosorbente collegato. Tali immunocomplessi sono più facilmente riconosciuti e distrutti dalle cellule immunitarie. Esistono diversi tipi di anticorpi, ognuno dei quali entra in azione in una fase specifica della risposta immunitaria. Pertanto, le immunoglobuline di classe M (IgM) vengono sintetizzate per prime in risposta alla penetrazione di un antigene nel corpo.

Il contenuto di questi anticorpi è più alto nei primi giorni del processo infettivo. Seguendoli, il sistema immunitario rilascia immunoglobuline di classe G (IgG) nel sangue, che aiutano a distruggere gli antigeni fino a quando l'infezione non è completamente sconfitta e continuano a circolare attraverso i vasi in futuro, fornendo immunità alla reinfezione.

La vaccinazione si basa su questo fenomeno: grazie alle vaccinazioni contenenti antigeni indeboliti di microbi e virus, nel nostro sangue appare una grande quantità di IgG che, a contatto con una minaccia reale, sopprime rapidamente l'infezione, prima che danneggi la salute. Esistono anche le immunoglobuline di classe A (si trovano in grandi quantità nelle mucose, proteggendo gli "approcci" al corpo), E (combattono le infezioni parassitarie) e altre.

Nella diagnostica di laboratorio, gli oggetti di interesse sono più spesso IgM, IgG e IgA: dalla loro concentrazione è possibile valutare in quale fase si trova il processo infettivo e anche scoprire se una persona è mai stata malata di uno o di un altro disturbo (ad esempio, rosolia o varicella). Come fai a sapere quali antigeni o anticorpi sono presenti nel corpo umano? Quando un medico sospetta che una certa infezione sia la causa della malattia, o vuole misurare la concentrazione di un certo ormone, prescrive al paziente un test immunoenzimatico.

La reazione "antigene-anticorpo" può essere riprodotta in condizioni di laboratorio: utilizzare anticorpi o antigeni già pronti per determinare se il composto corrispondente è presente nel campione in esame. Innanzitutto, è necessario ottenere un campione di fluido biologico, solitamente siero di sangue. Il laboratorio utilizza piastre di plastica con pozzetti che contengono già antigeni purificati del sospetto patogeno (o anticorpi se il compito è cercare un antigene).

I campioni vengono posti in pozzetti dove si formano o meno immunocomplessi. Se il "meeting" ha avuto luogo, un particolare colorante entra in una reazione enzimatica con la molecola combinata, che consente di trarre una conclusione sui risultati dell'analisi utilizzando una valutazione strumentale della densità ottica.

ELISA è qualitativo e quantitativo. Nel primo caso, è implicita una risposta univoca: la sostanza desiderata è stata trovata o non è stata trovata nel campione.

Nel caso dell'analisi quantitativa, una catena di reazioni più complessa consente di valutare la concentrazione di anticorpi nel sangue di una persona, che, rispetto ai risultati dei test precedenti, risponderà alla domanda su come si sviluppa il processo infettivo. È interessante notare che il precursore del dosaggio immunoenzimatico era il dosaggio radioimmunologico, che utilizzava anticorpi e antigeni marcati per identificare una reazione di successo. Poiché l'esecuzione di tale diagnostica rappresentava una potenziale minaccia per la salute del personale di laboratorio, gli scienziati hanno iniziato a cercare un'alternativa sicura per "colorare" i campioni. Così nel 1971 fu inventato l'IFA.

Varie classi di anticorpi IgG, IgM, IgA

Il test immunoassorbente legato all'enzima rileva gli anticorpi di infezioni appartenenti a diverse classi di Ig (G, A, M). Gli anticorpi contro il virus, in presenza di infezione, sono determinati in una fase molto precoce, il che garantisce una diagnosi e un controllo efficaci del decorso delle malattie. I metodi più comuni per diagnosticare le infezioni sono i test per gli anticorpi IgM (fase acuta dell'infezione) e gli anticorpi IgG (resistenti alle infezioni). Questi anticorpi sono determinati per la maggior parte delle infezioni.

Tuttavia, uno dei test più comuni - lo screening ospedaliero (test per HIV, sifilide ed epatite B e C) non differenzia il tipo di anticorpi, poiché la presenza di anticorpi contro i virus di queste infezioni suggerisce automaticamente un decorso cronico della malattia ed è una controindicazione, ad esempio, per interventi chirurgici gravi. Pertanto, è importante confutare o confermare la diagnosi.

Test immunosorbente collegato. Una diagnosi dettagliata del tipo e della quantità di anticorpi in una malattia diagnosticata può essere eseguita superando un'analisi per ciascuna specifica infezione e tipo di anticorpi. L'infezione primaria viene rilevata quando viene rilevato un livello diagnosticamente significativo di anticorpi IgM in un campione di sangue o un aumento significativo del numero di anticorpi IgA o IgG in sieri accoppiati presi con un intervallo di 1-4 settimane.

La reinfezione, o reinfezione, viene rilevata da un rapido aumento dei livelli di anticorpi IgA o IgG. Gli anticorpi IgA sono più alti nei pazienti più anziani e diagnosticano più accuratamente l'infezione in corso negli adulti.

L'infezione passata nel sangue è definita come un aumento degli anticorpi IgG senza un aumento della loro concentrazione in campioni accoppiati prelevati con un intervallo di 2 settimane. Allo stesso tempo, non ci sono anticorpi delle classi IgM e A.

Anticorpi IgM

La loro concentrazione aumenta subito dopo la malattia. Gli anticorpi IgM vengono rilevati già 5 giorni dopo la loro insorgenza e raggiungono un picco nell'intervallo da una a quattro settimane, quindi diminuiscono a livelli diagnosticamente insignificanti entro diversi mesi, anche senza trattamento. Tuttavia, per una diagnosi completa, non è sufficiente determinare solo gli anticorpi di classe M: l'assenza di questa classe di anticorpi non significa assenza della malattia. Non esiste una forma acuta della malattia, ma può essere cronica.

Gli anticorpi IgM sono di grande importanza nella diagnosi dell'epatite A e delle infezioni infantili (rosolia, pertosse, varicella), facilmente trasmesse dalle goccioline trasportate dall'aria, poiché è importante identificare la malattia il prima possibile e isolare la persona malata.

Anticorpi IgG

Il ruolo principale degli anticorpi IgG è la protezione a lungo termine del corpo contro la maggior parte dei batteri e virus - sebbene la loro produzione avvenga più lentamente, la risposta a uno stimolo antigenico rimane più stabile di quella degli anticorpi della classe IgM.

Test immunosorbente collegato. I livelli di anticorpi IgG aumentano più lentamente (15-20 giorni dopo l'insorgenza della malattia) rispetto agli IgM, ma rimangono elevati più a lungo, e quindi possono mostrare un'infezione di lunga durata in assenza di anticorpi IgM. I livelli di IgG possono essere bassi per molti anni, ma con l'esposizione ripetuta allo stesso antigene, i livelli di anticorpi IgG aumentano rapidamente.

Per un quadro diagnostico completo, è necessario determinare simultaneamente gli anticorpi IgA e IgG. Se il risultato IgA non è chiaro, confermare con determinazione IgM. In caso di risultato positivo e per una diagnosi accurata, un secondo test eseguito 8-14 giorni dopo il primo deve essere verificato parallelamente per determinare l'aumento della concentrazione di IgG. I risultati dell'analisi dovrebbero essere interpretati insieme alle informazioni ottenute in altre procedure diagnostiche.

Gli anticorpi IgG, in particolare, vengono utilizzati per diagnosticare l'Helicobacter pylori, una delle cause di ulcere e gastrite.

Anticorpi IgA

Appaiono nel siero 10-14 giorni dopo l'insorgenza della malattia e all'inizio possono essere trovati anche nei fluidi seminali e vaginali. I livelli di anticorpi IgA di solito diminuiscono entro 2-4 mesi dopo l'infezione se il trattamento ha successo. Dopo la reinfezione, il livello degli anticorpi IgA aumenta di nuovo. Se il livello di IgA non scende dopo il trattamento, questo è un segno di una forma cronica di infezione.

Vantaggi del metodo

I vantaggi indiscutibili dell'ELISA sono l'elevata sensibilità e specificità del metodo. La sensibilità è la capacità di riconoscere la sostanza bersaglio, anche se la sua concentrazione nel campione è bassa. La specificità, invece, implica l'accuratezza della diagnosi: se il risultato è positivo, significa che è stato trovato esattamente l'anticorpo o l'antigene che si presumeva, e non qualche altro.

Il test immunoassorbente legato all'enzima ha ampiamente sostituito il "gold standard" della microbiologia - un metodo diagnostico batteriologico, durante il quale, per identificare l'agente patogeno, era necessario isolarlo dal corpo e quindi far crescere la coltura in un terreno di coltura in una provetta per diversi giorni. Per tutto il tempo, durante le analisi, i medici sono stati costretti a trattare il paziente "alla cieca", indovinando l'origine del microrganismo dai sintomi della malattia.

La determinazione dell'IgM mediante ELISA consente di effettuare una diagnosi accurata già nei primi giorni di malattia. L'alto grado di producibilità del dosaggio immunoenzimatico riduce al minimo l'influenza del fattore umano, riducendo la probabilità di errore. La maggior parte dei kit di test ELISA e dei reagenti utilizzati nei laboratori moderni sono prodotti in un ambiente industriale, il che garantisce un risultato accurato.

Svantaggi del metodo

Sfortunatamente, per eseguire l'ELISA, è necessario sapere cosa cercare esattamente: la tecnica di analisi implica che il medico abbia un'ipotesi in anticipo sulla natura della malattia. Pertanto, non ha senso prescrivere un tale test nella speranza di "indovinare" accidentalmente la diagnosi. Nel caso della diagnosi di malattie infettive, il dosaggio immunoenzimatico non riesce a trovare il patogeno e a determinarne le proprietà specifiche: indica solo la presenza di anticorpi nel sangue del paziente, indicando indirettamente la presenza di un microrganismo estraneo nel corpo umano.

L'ELISA è un metodo estremamente preciso, ma non economico, quindi è necessario utilizzarlo con saggezza e un medico qualificato dovrebbe interpretare i risultati.

Indicazioni per appuntamento e malattie rilevate

È impossibile coprire l'elenco completo delle indicazioni per ELISA. Gli scopi più comuni dell'analisi sono: Diagnosi di malattie infettive acute e croniche:

• IgM e IgG contro l'epatite virale A, B, C, E, nonché gli antigeni dell'epatite B e C;
• IgG all'HIV; Ig M e IgG contro l'infezione da citomegalovirus;
• Ig M e IgG al virus di Epstein-Barr; Ig M e IgG alle infezioni da herpes;
• Ig M e IgG alla toxoplasmosi;
• Ig M e IgG contro morbillo, rosolia, salmonellosi, dissenteria, encefalite trasmessa da zecche e altre malattie;
• IgG a malattie parassitarie;
• Ig M e IgG alle infezioni a trasmissione sessuale;
• Infezione da IgG a Helicobacter pylori.

Valutazione generale degli indicatori dell'immunità umana e dei marker di alcune malattie autoimmuni. Identificazione di marker oncologici (fattore di necrosi tumorale, antigene prostatico specifico, antigene embrionale tumorale e altri). Determinazione del contenuto di ormoni nel siero del sangue (progesterone, prolattina, testosterone, ormone stimolante la tiroide e altri).

Il biomateriale analizzato e le caratteristiche della sua collezione

Il principale biomateriale per ELISA è il siero di sangue: in laboratorio, dal paziente viene prelevato un campione di sangue da una vena, da cui vengono ulteriormente rimossi gli elementi sagomati che complicano l'analisi. In alcuni altri casi, per l'analisi vengono utilizzati liquido cerebrospinale, liquido amniotico, macchie di mucose, ecc.

Per evitare distorsioni nei risultati, si consiglia di donare il sangue a stomaco vuoto e, due settimane prima dello studio (se l'obiettivo è diagnosticare malattie infettive croniche e latenti), è necessario interrompere l'assunzione di antibiotici e farmaci antivirali. Condizioni di preparazione dei risultati ELISA Se si dispone dei reagenti necessari e di una buona organizzazione del laboratorio, si riceverà il risultato del test entro 1-2 giorni dalla raccolta del sangue. In alcuni casi, se è necessaria una risposta di emergenza, questo periodo può essere ridotto a 2-3 ore.

I risultati dell'IFA sono pronti

Se si dispone dei reagenti necessari e di una buona organizzazione del laboratorio, si riceverà il risultato del test entro 1-2 giorni dalla raccolta del sangue. In alcuni casi, se è necessaria una risposta di emergenza, questo periodo può essere ridotto a 2-3 ore.

Decodifica del dosaggio immunoenzimatico

Il risultato di un ELISA di alta qualità sarà un verdetto inequivocabile: la sostanza desiderata è stata trovata o non è stata trovata nel campione. Se parliamo di analisi quantitativa, la concentrazione può essere espressa come un valore numerico o un certo numero di segni "+" (da uno a più).

Indicatori analizzati:

• IgM: la presenza di questa classe di immunoglobuline indica un processo infettivo acuto nel corpo. L'assenza di IgM può indicare sia l'assenza di uno specifico patogeno nel corpo, sia il passaggio dell'infezione allo stadio cronico.
• IgA con un test IgM negativo il più delle volte indica un'infezione cronica o latente. IgM e IgA (presenza articolare): due risultati positivi indicano l'altezza della fase acuta della malattia.
• L'IgG parla della cronicità della malattia o del recupero e dello sviluppo dell'immunità a un agente infettivo.

Possibili risultati ELISA

A seconda del contenuto dell'analisi, il modulo può presentare dati sotto forma di una tabella che elenca tutti gli anticorpi o antigeni con note su una reazione negativa o positiva, oppure verrà indicato il valore quantitativo del risultato (negativo, debolmente positivo, positivo o nettamente positivo). Quest'ultima opzione determina quanti anticorpi sono contenuti nel campione analizzato. Un altro indicatore quantitativo è l'indice di avidità degli anticorpi, espresso in percentuale.

Indica quanto tempo è trascorso dall'inizio del processo infettivo (maggiore è l'indice, maggiore è).

Oggi vengono prodotti migliaia di tipi di sistemi di test ELISA, che consentono la rilevazione di anticorpi e antigeni specifici in un'ampia varietà di patologie.

Pertanto, questa analisi viene utilizzata in quasi tutte le industrie mediche. La diagnosi fatta con l'ausilio di ELISA è garanzia della nomina di una terapia adeguata e di un trattamento efficace della malattia.

Finalmente

A volte, avendo rilevato anticorpi IgG nei risultati del test, ad esempio toxoplasmosi o herpes, i pazienti vanno nel panico, non vedendo che gli anticorpi IgM che indicano la presenza di un'infezione in corso potrebbero non essere affatto presenti. In questo caso, l'analisi parla di una precedente infezione, a cui si è sviluppata l'immunità.

In ogni caso, è meglio affidare l'interpretazione dei risultati dell'analisi al medico e con lui, se necessario, determinare le tattiche di trattamento.

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